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芽孢杆菌属物种的丝氨酸蛋白酶制造技术 (2)

2017-09-09 15:37:42 来源:网络 编辑:K027_小凯乐
 
2014.10.27 US 62/069,1791.一种枯草杆菌蛋白酶的BspE04637进化枝,所述枯草杆菌蛋白酶的BspE04637进化枝包含含有一个或多个选自以下基序的枯草杆菌蛋白酶或重组多肽或其活性片段:i.DTGIXXXHXDLXXXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:31)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;ii.DTGIXXXHXDLXXXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:32)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;iii.DTGIXXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:33)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;iv.DTGIXXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:34)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;v.DTGIDXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:35)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸且末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;vi.DTGIDXNHXDLNVRGGXSVFTXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:36)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;以及vii.DTGIDXNHXDLNVRGGXSVFTXXXXXDPYYDXXGH(SEQIDNO:37)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸且末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸。2.根据权利要求1所述的枯草杆菌蛋白酶的BspE04637进化枝,其中所述枯草杆菌蛋白酶或重组多肽或其活性片段进一步包含与选自由SEQIDNO:3、6和9组成的组的氨基酸序列具有至少70%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的枯草杆菌蛋白酶的BspE04637进化枝,条件是所述枯草杆菌蛋白酶和/或重组多肽或其活性片段不包含BAD02409或JP2003325186-0001。4.如上述权利要求中任一项所述的枯草杆菌蛋白酶的BspE04637进化枝,其中所述枯草杆菌蛋白酶和/或重组多肽或活性片段具有蛋白酶活性。5.一种重组多肽或其活性片段,包含与选自由SEQIDNO:3、6和9组成的组的氨基酸序列具有至少80%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。6.BspE04637进化枝的一种重组多肽或其活性片段。7.权利要求6所述的重组多肽或其活性片段,其中所述重组多肽或活性片段包含一个或多个选自以下的基序:i.DTGIXXXHXDLXXXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:31)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;ii.DTGIXXXHXDLXXXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:32)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;iii.DTGIXXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:33)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;iv.DTGIXXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:34)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;v.DTGIDXXHXDLNVXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQIDNO:35)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸且末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;vi.DTGIDXNHXDLNVRGGXSVFTXXXXXDPXXDXXGH(SEQIDNO:36)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸,末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸;以及vii.DTGIDXNHXDLNVRGGXSVFTXXXXXDPYYDXXGH(SEQIDNO:37)基序,其中初始D是活性位点天冬氨酸且末端H是活性位点组氨酸,并且X是任何氨基酸。8.权利要求6或7所述的重组多肽或其活性片段,其中所述重组多肽或其活性片段进一步包含与选自由SEQIDNO:3、6和9组成的组的氨基酸序列具有至少70%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。9.权利要求5-8中任一项所述的重组多肽或其活性片段,条件是所述枯草杆菌蛋白酶和/或重组多肽或其活性片段不包含BAD02409或JP2003325186-0001。10.权利要求5-9中任一项所述的重组多肽或其活性片段,其中所述多肽具有蛋白酶活性。11.权利要求10所述的重组多肽或其活性片段,其中所述蛋白酶活性包括酪蛋白水解活性或二甲基酪蛋白水解活性。12.权利要求5-11中任一项所述的重组多肽或其活性片段,其中所述多肽在6至12的pH范围内和/或在55℃至80℃的温度范围内保留其最大蛋白酶活性的至少50%。13.权利要求5-12中任一项所述的重组多肽或其活性片段,其中所述多肽在胁迫条件下在50℃20分钟后保留至少60%的活性。

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